一. 背景
洋蔥伯克霍爾德菌,拉丁名:Burkholderia cepacia (B. cepacia),原屬假單胞菌屬(Pseudomonas cepacia),是植物病原菌,因引起植物患病而得名,1971年首次有引起人類感染的報道。是囊性纖維化(CF)患者和慢性肉芽腫性病患者的條件致病菌。
參照PDA TR67中:“表2:與產品召回、非無菌制劑引起的感染及臨床感染相關的常見微生物種類”,與洋蔥伯克霍爾德菌有關的產品召回事件在所有召回事件中(N=144)占據首位(出現34 次),也占據著大眾視野。該菌已經被美國FDA列為不可接受微生物。
二. 生長特性
(1) 洋蔥伯克霍爾德菌為需氧非發酵菌,最適生長溫度為30-35℃;革蘭氏染色,在顯微鏡下觀察,為革蘭氏陰性無芽孢桿菌;
(2) 氧化酶試驗:遲緩性氧化酶陽性(紫紅色、紫色或者深藍色),反應時間為2-10min;
(3) 過氧化氫酶試驗:洋蔥伯克霍爾德菌為遲緩產氣,1s后緩慢出現氣泡;
(4) 蔗糖氧化陽性;枸櫞酸鹽利用試驗陽性;七葉苷利用陽性;
(5) 在藥品檢驗用非選擇性培養基中(TSA/TSB/SDA/SDB/NA/NB/R2A)能夠生長良好,在選擇性培養基麥康凱液體(MACB)、麥康凱瓊脂(MACA)和紫紅膽鹽瓊脂培養基(VRBGA)中能夠生長良好。在CA上25℃培緩慢生長。EE里緩慢生長,RVS和XLD不支持該菌生長。
三. 相關檢測標準
(1)《SN/T 4684-2016 進出口化妝品中洋蔥伯克霍爾德菌檢驗方法》
該標準規定了進出口化妝品檢驗洋蔥伯克霍爾德菌方法為:分別用含多粘菌素B的SCDLP增菌液和含慶大霉素的BCSA增菌液依次進行增菌培養,再分別在BCSA瓊脂(含多粘菌素B和慶大霉素)和麥康凱瓊脂(含多粘菌素B和慶大霉素)平板上進行分離培養;最后對疑似菌落進行鑒定。
(2)《SN/T 4485-2016 進出口口腔清潔類產品中洋蔥伯克霍爾德菌檢驗方法》
該標準規定了進出口口腔清潔類產品中檢驗洋蔥伯克霍爾德菌方法為:通過改良LETHEEN氏肉湯增菌培養,再劃線接種在洋蔥伯克霍爾德菌瓊脂上進行分離培養,最后對疑似菌進行鑒定。
(3)USP42<60> MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS—TESTS FOR BURKHOLDERIA CEPACIA COMPLEX
USP42<60>規定了使用TSB對樣品進行預培養,在BCSA上劃線選擇性培養。洋蔥伯克霍爾德菌可能存在的指示特征為周圍黃色的綠棕色菌落,或者周圍粉紅色的白色菌落。挑選可疑菌進行鑒定。
四. 關于BCSA培養基(USP)
其中酪胨和酵母提取物提供豐富的氮源,乳糖和蔗糖提供兩種碳源,酚紅指示劑,結晶紫、萬古霉素抑制革蘭氏陽性菌的生長,慶大霉素抑制部分革蘭氏陰性菌的生長,多粘菌素B可抑制銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌等菌的生長。
目前,北京三藥針對洋蔥伯克霍爾德菌的檢驗開發了兩種培養基,洋蔥伯克霍爾德菌選擇性瓊脂基礎(符合USP)和BCC培養基基礎以及對應的配套試劑。
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