藥品微生物檢驗常見問題問答集錦（一）
發布時間：2020-05-28
問：沙氏葡萄糖瓊脂培養基（SDA）上會不會生長細菌？
答：SDA不是選擇性培養基，而是一種廣譜的增菌培養基，pH范圍5.4-5.8，某些細菌是可以在SDA上生長的，霉菌和酵母菌總數計數時SDA上生長的菌均應計入霉菌和酵母菌總數；或者可以經過評估選擇含有抗生素（如氯霉素）的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養基進行霉菌和酵母菌總數計數。
問：沙氏葡萄糖瓊脂培養基（SDA）上會不會生長細菌？
答：SDA不是選擇性培養基，而是一種廣譜的增菌培養基，pH范圍5.4-5.8，某些細菌是可以在SDA上生長的，霉菌和酵母菌總數計數時SDA上生長的菌均應計入霉菌和酵母菌總數；或者可以經過評估選擇含有抗生素（如氯霉素）的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養基進行霉菌和酵母菌總數計數。
問：中國藥典2015版要求霉菌和酵母菌平皿計數時培養5-7天，那么培養5天可以么？
答：微生物限度檢查中霉菌和酵母菌培養時間5-7天，因不同的霉菌酵母菌生長特性不同，所以具體培養時間，由企業根據各自情況（基于風險評估）自行確定。
問：中國藥典2015版要求霉菌和酵母菌平皿計數時培養5-7天，該如何計數？
答：但是在實際操作中，我們會發現如果樣品中存在霉菌，培養到第5-7天時，可能菌落之間已經融合，并蔓延生長至整個平皿，此時的霉菌已經無法計數。建議霉菌和酵母菌檢測時，第三天計一次數，培養結束時計一次數，比較兩組數據，以多者為最終結果。霉菌和酵母菌檢測培養過程中，避免頻繁取拿觀察，盡量避免振動等，防止孢子擴散。
問：藥企的環境檢測應該依據那個標準？
答：關于環境檢測，2015版《中國藥典》的9205和GB/T16294-2010《醫藥工業潔凈室(區)懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》都有規定，且一些細節略有差別。其中國標的規定更為具體，建議實際操作中以國標為準，藥典可以做為參考。
問：一些不常用的培養基開瓶后在效期內較長時間沒有用完，那么這些開瓶后的培養基需要進行復驗嗎？
答：開瓶后的培養基，如果長時間不使用，還在效期內，建議開瓶后間隔1年進行復驗。如果出現結塊，則不能使用。同理，如果同一批次一次購買量較多，一年內未使用完，也建議進行復檢。
問：薄膜過濾法，濾膜邊緣長了一圈菌，原因有哪些？
答：出現這個現象，可能的原因（常見）包括以下三個方面：
（1）濾杯：無論是一次性的濾杯還是反復滅菌的濾杯，理論上都是無菌的，但是不排除濾杯滅菌不徹底和使用時操作人員與濾杯底部接觸，污染濾杯的可能。
（2）微限儀的濾頭：微限儀濾頭如果在更換濾膜的過程中滅菌不徹底，上一個樣品可能會污染下一批濾膜，如果微限儀長時間不滅菌，或使用的濾膜破損，都可能使微限儀內部管道帶菌，在泵開啟的瞬間形成氣溶膠，污染濾頭。
（3）轉移過程中被污染：在濾膜由濾頭轉移至平皿的過程中，鑷子滅菌不徹底，操作者手不穩使濾膜和儀器，臺面，平皿，身體發生過接觸。
具體問題具體分析，如果出現這樣的問題，需要根據實驗室的實際情況具體分析。
問：控制菌檢查法中用到的培養基，在做培養基適用性的時候，其中有“指示特性”的表述，那么“指示特性”是指的什么意思？
答：培養基指示特性包括菌落大小、形態特征、指示劑反應情況（菌落顏色變化）等。例如大腸埃希氏菌在麥康凱瓊脂培養基上桃紅色菌落有沉淀環、乙型副傷寒沙門菌在XLD有黑心等。
問： 無菌檢查法用到的培養基（FTM和TSB）進行培養基適用性檢查的時候需不需要使用對照培養基？
答：在2015版《中國藥典》無菌檢查法通則1101中，并沒有強制規定靈敏度檢查需要使用對照培養基，所以不使用對照培養基也是可以的。但是國家有FTM和TSB的對照培養基，建議在做FTM和TSB的培養基適用性時，使用對照培養基進行參比。
問： 生孢梭菌如何計數？
答：（1）使用用硫乙醇酸鹽流體培養基，在培養16-18小時這個時間進行觀察，計數，計數前不要搖晃，培養時間太長，培養基將渾濁，點計不清；（2） 使用哥倫比亞瓊脂培養基，澆注或涂布后，置厭氧罐（袋）里，再置培養箱培養，計數。
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